酶底物法檢較臟水樣中大腸菌群時的稀釋問題

日常微生物檢測中，當(dāng)面臨著水體污染嚴(yán)重的水樣檢測結(jié)果已超出檢測限時，這時就需要我們對水樣進(jìn)行稀釋。

目前《水與廢水標(biāo)準(zhǔn)檢測法》、《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》中的多管發(fā)酵法、濾膜法或是酶底物法，就算是定量范圍（1-2419MPN/100ml）的酶底物法面對較臟的地下水或者排污口的水樣也需要稀釋到100倍甚至1000倍。我們都知道，微生物實(shí)驗(yàn)的不穩(wěn)定性，當(dāng)我們進(jìn)行稀釋時，結(jié)果固然會有影響，我們要做的就是盡量減少誤差。

1、實(shí)驗(yàn)步驟越少，結(jié)果偏差也會越小，所以酶底物法步驟少，會更有優(yōu)勢。

2、在做稀釋時，應(yīng)保證取樣量大，譬如10倍稀釋：取10ml原液+90ml無菌水配成100ml10倍稀釋液①；若是要百倍千倍稀釋，則需要進(jìn)行梯度稀釋，由①中的10倍稀釋樣再取10ml，再加90ml無菌水，此時完成了100倍的稀釋。若是千倍稀釋，則需要從100倍稀釋樣中再取 10ml進(jìn)行稀釋。

3、每次再去原液時，取樣的均勻程度直接影響了后面的稀釋結(jié)果，故我們在每次取樣前必須充分搖勻。

4、為了使數(shù)據(jù)更加地穩(wěn)定及接近真實(shí)值，建議每個梯度稀釋做平行樣。這時，我們可以設(shè)計(jì)成取20ml原液加180ml無菌水配成200ml樣或者取30ml加270ml無菌水配成300ml10倍稀釋樣，以此往下做梯度稀釋。若是未知樣且濃度可能會很高的時候，我們建議這樣去稀釋，因?yàn)檫@樣我們便可以保證每個梯度至少有一個樣。若已經(jīng)大概了解水樣來源及濃度，可直接梯度稀釋到我們要的濃度，并做2-3個平行樣。

5、對于未知樣需要進(jìn)行濃度的摸索，無論是多管還是酶底物法，都會有較大工作量。前期的梯度稀釋及每個梯度做平行樣都是無法避免的，當(dāng)我們后期對水樣濃度有了把握后便可以直接稀釋到某個濃度，這樣就減少許多的工作量了。由于酶底物法是已滅菌可直接用的選擇性培養(yǎng) 基，比起多管法會更加簡便、不用洗大量的管子。另外濾膜法在做臟水時就完全不適合了。